Об очках:

Причины популярности прилегающих очков

News image

Прилегающая форма завоевала популярность в коллекциях спортивных и солнцезащитных очков во многих странах, и спрос на очки такого дизайна продолжает...

Ваши новые очки, или подробности о титановых оправах

News image

Химический элемент титан был открыт в 1791 году в Англии Уильямом Грегором, а официальное название «титан» было дано ему 4 года спустя М.Х. Клапрото...

Особенности положения линз в прилегающих оправах

News image

Кривизна и прилегающая форма, которые делают спортивные очки такими функциональными, оказывают влияние на оптические свойства и расположение очковых...

Разнообразие сфер применения

News image

Большую глубину и лучшую фокусировку профессиональных линз смогут по достоинству оценить, в частности, люди следующих профессий: архитекторы, стомат...



Экспертиза биологически активных добавок и лекарственных препаратов для зрения

Как улучшить зрение - Новые технологии лечения нарушений зрения

экспертиза биологически активных добавок и лекарственных препаратов для зрения

Д.х.н. Готтих М.Б., Ташлицкий В.Н.
НИИ физико-химической биологии имени А.Н. Белозерского МГУ

Введение

Антоцианозиды и флавоноиды, содержащиеся в листьях и плодах черники(Vaccinium myrtillus), благодаря их выраженному антиоксидантному и сосудопротекторному действию, представляют для офтальмологов особый интерес [1].

По данным различных авторов, антоцианозиды черники способствуют улучшению реологических свойств крови, поскольку снижают тонус сосудистой стенки и способствуют ее укреплению (эффект обусловлен участием данных веществ в регуляции биосинтеза коллагена), уменьшают тромбообразование, а также ускоряют регенерацию обесцвеченного родопсина - светочувствительного пигмента сетчатки. Ускорение регенерации родопсина и активация ферментов сетчатки под влиянием экстракта черники улучшают ночное зрение, снижают риск развития дистрофии сетчатки, ускоряют процесс восстановления зрения после длительных зрительных нагрузок [2,8]. За счет положительного влияния на синтез фосфолипидов клеточных мембран, антоцианозиды черники уменьшают хрупкость капилляров, восстанавливают их проходимость при сосудистых расстройствах (тромбозах), что способствует улучшению трофики сетчатки глаза.

Кроме того, антоцианозиды и флавоноиды черники подавляют патологическую альдозо-редуктазную активность в тканях хрусталика и предупреждают развитие катаракты [3].

Антоцианозиды являются основными действующими на зрение веществами черники. Они представляют из себя соединения антоцианинов с углеводами (гликозиды) [4]. Это состояние обеспечивает их устойчивость к свету и действию ферментов, а кроме того - в форме гликозидов улучшается растворимость пигментов в клеточном соке [5]. Гликозиды из состава антоцианозидов не проходят через клеточную мембрану, поэтому основу фармакологической активности экстрактов составляют именно антоцианины [6]. Эффективность антоцианинов доказана в ряде исследований [7].

В настоящее время в России зарегистрированы несколько пищевых добавок и лекарственных препаратов офтальмологического профиля, содержащих экстракты черники. Поскольку польза препаратов с черникой напрямую зависит от концентрации антоцианинов в них, нами была проведена экспертизабиологически активных добавок и лекарственных препаратов для зрения с целью определения качественного и количественного состава. Для анализа мы использовали высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ) и рН-дифференциальную УФ-спектрофотометрию.

Цель исследования: определение количественного и качественного содержания антоциановых пигментов черники в пяти образцах следующих препаратов: «Фокус» (производитель АКВИОН, Россия), «Витрум вижн форте» (производитель Unipharm Inc, США), «Черника-форте» (производитель Эвалар, Россия), «Окулист» (производитель ДИОД, Россия), «Стрикс» (производитель Ferrosan, Дания).

Материалы и методы исследования:

Для исследований в аптеках и аптечных пунктах были закуплены пять образцов биологически активных добавок для глаз, в состав которых входит черника: «Витрум вижн форте», «Фокус», «Стрикс», «Окулист», «Черника-форте».

В работе данные образцы были зашифрованы следующим образом:

Препарат

«Фокус» (АКВИОН, Россия)

1

«Витрум вижн форте» (Unipharm Inc, США)

2

«Черника-форте» (Эвалар, Россия)

3

«Окулист» (ДИОД, Россия)

4

«Стрикс» (Ferrosan, Дания)

5

Подготовка образцов для исследования:

Антоцианины из образцов экстрагировали дистиллированной водой из расчета содержания антоцианинов 0,05–0,2 мг/мл [9]. Для этого таблетка или содержимое капсулы тщательно измельчались в агатовой ступке. Для экстракции соответствующая навеска порошка каждого образца помещалась в пластиковую пробирку объемом 50 мл и добавлялся рассчитанный объем дистиллированной воды (от 10 до 50 мл в зависимости от навески и образца) для получения растворов с концентрацией 2,0; 4,0; 5,0; 2,0 и 2,0 мг/мл для образцов 1–5 соответственно. Для ВЭЖХ исследования были приготовлены растворы с большей концентрацией – 20,0 мг/мл; 40,0; 50,0; 20,0 и 20,0 мг/мл для образцов 1–5 соответственно. Экстракция проводилась при непрерывном перемешивании на термошейкере C24KC Refrigerated incubator shaker Edison, NJ, USA, при 160 об./мин, температуре 37 оС, в течение 30 мин. Из полученных растворов отбирались аликвоты объемом 1 мл, которые центрифугировали 10 мин при 14 000 об./мин, фильтровали через Millex-GV13, 0,22 um, 13 mm Filter Unit, MILLIPORE и хранили при –10 оС.

Определение суммарного содержания антоцианиновых пигментов методом рН-дифференциальной спектрофотометрии.

Для метода рН-дифференциальной спектрофотометрии были использованы буферные растворы № 1 и № 2:

·  Раствор № 1: рН 1 – 4,05 мг КСl, 1,238 мл конц. НСl в 100 мл воды.

·  Раствор № 2: рН 4,5 – 1,64 г натрия ацетата в 100 мл воды и НСl до рН 4,5.

К 0,96 мл буферного раствора № 1 или № 2 добавляли 40 мкл экстракта, приготовленного как описано выше, и определяли оптическую плотность при 510 нм и 700 нм с соответствующим буфером в качестве раствора сравнения. Использовали УФ-спектрофотометр Cary 50bio производства Varian (США). Для каждого образца эксперимент проводили дважды.

Суммарное содержание антоцианиновых пигментов рассчитывали по формуле [7]:

С (Σантоцианин, масс. %) = 100 %Ч[(А510рН1– А700рН1) – (А510 рН4,5 – А700рН4,5)] Ч MW Ч F/(ε Ч l Ч C),

где:

ε и MW – коэффициенты молярного поглощения и молекулярная масса антоцианина, используемого в качестве стандарта (для цианидин-3-глюкозида 26 900 и 449,2 соответственно);

F = 25 – коэффициент разведения;

l =1 – длина оптического пути кюветы, см;

C – концентрация приготовленного раствора образца, г/л.

Определение качественного состава антоцианиновых пигментов методом ВЭЖХ

Качественный состав антоцианиновых пигментов определялся методом обращеннофазной ВЭЖХ на колонке Gemini C18(2) 4,6Ч150 mm (5um) производства Phenomenex (США). Использовалось градиентное элюирование с подвижной фазой А (0,151 % раствор трифторуксусной кислоты в воде) и подвижной фазой В (0,151 % раствор трифторуксусной кислоты в ацетонитриле) по программе 5–40 % В за 11 мин при скорости потока 1,5 мл/мин, температуре 25 °С, с УФ-детекцией при 520 нм и УФ-спектральными данными от 230 до 800 нм. Был использован хроматограф Agilent1100, состоящий из четырехканального градиентного насоса с дегазатором, автосамплера, термостата и диодно-матричного детектора. Сбор и обработка хроматограмм осуществлялась с помощью программ «ChemStation B.01.03» и «ACD/SpecManager 12.01».

Для ВЭЖХ-анализа образцов № 1, 4, 5 с концентрацией 20 мг/мл использовалась аликвота 1 мкл, а для образцов № 2, 3 с концентрацией 40 и 50 мг/мл – аликвота 10 мкл.

Результаты исследования и их обсуждение

С помощью УФ-спектрометрического анализа было исследовано суммарное содержание антоцианиновых пигментов во всех образцах. Полученные данные приведены в таблице 1.

Таблица 1. Расчет среднего содержания суммы антоцианиновых пигментов в образцах № 1–5 методом рН-дифференциальной спектрофотометрии

№ образца

C образца, г/л

А510

рН 1

А700

рН 1

А510

рН 4,5

А700

рН 4,5

Суммарная концентрация антоцианиновых пигментов, %

Масса капсулы (таблетки), г

Масса пустой капсулы

Масса суммы антоцианиновых пигментов в капсуле (таблетке), мг

Заявленная масса антоцианов, мг

1

2

0,2606

0,0046

0,0587

0,0051

4,225

0,382

0,0958

12,09 ± 0,97

12,5

2

4

0,0038

0

0,0031

0,0006

0,014

0,833

0

0,11 ± 0,009

-

3

5

0,022

–0,0002

0,0025

0,0004

0,168

0,2545

0

0,43 ± 0,034

-

4

2

0,0912

0,0001

0,0129

0,0011

1,655

0,3819

0,0731

5,11 ± 0,41

10

5

2

0,1035

–0,0001

0,0103

0,0009

1,966

0,459

0

9,03 ± 0,72

-

Как видно из полученных данных, все анализируемые образцы содержат антоцианиновые пигменты, однако их концентрация в разных образцах варьируется в широком диапазоне от 0,01 до 4,2 %, а содержание в одной таблетке или капсуле от 0,1 мг до 12,1 мг.

Для определения качественного состава образцов использовался метод обращеннофазной ВЭЖХ. Полученные результаты приведены на рис. 2. Отнесение пиков проводилось на основании времен удерживания и соотношения площадей. Времена удерживания и соответствующие площади пиков приведены в таблице 2. Как видно из хроматограмм и таблицы 2, качественный состав и соотношение компонентов всех исследованных образцов, кроме образца № 2, практически одинаковы (в пределах погрешности метода определения площади плохо разрешенных пиков) и соответствуют литературным данным для экстрактов черники [7]. Хроматографический профиль образца № 2 не соответствует антоцианиновым пигментам черники и, очевидно, имеет другой источник.

Таблица 2. Средние времена удерживания и площади хроматографических пиков, полученных при ВЭЖХ-анализе образцов № 1–5

v – объем аликвоты раствора образца, использованной для анализа;

C – концентрация раствора образца.

Выводы

На основании полученных данных (качественный анализ методом оф-ВЭЖХ) можно утверждать, что все исследованные образцы препаратов, кроме «Витрум вижн форте» (Unipharm Inc, США), действительно содержат антоцианиновые пигменты из экстрактов черники, а не из других природных источников. Препарат «Витрум вижн форте» (Unipharm Inc, США) содержит небольшое количество антоцианиновых пигментов из другого источника. Кроме того, количественное содержание этих соединений, определенное методом рН-дифференциальной спектрофотометрии, варьируется в широком диапазоне. В исследованных нами пищевых добавках и лекарственных препаратах офтальмологического профиля содержатся антоцианиновые пигменты из экстрактов черники (и другого источника) в следующем количестве (препараты расположены в порядке убывания):

Препарат

Содержание антоцианов черники в таблетке (капсуле), мг

«Фокус» (АКВИОН, Россия)

12,09

«Стрикс» (Ferrosan, Дания)

9,03

«Окулист» (ДИОД, Россия)

5,11

«Черника-форте» (Эвалар, Россия)

0,43

«Витрум вижн форте» (Unipharm Inc, США)

0,11




Читайте:


Добавить комментарий


Защитный код
Обновить

Как улучшить зрение:

News image

Жданов о методе Бейтса

Я когда в девяносто четвертом году за неделю восстановил зрение плюс два, да я домой летел как на крыльях. Ну, думаю, мы сейчас весь мир перевернем. А у меня жена — очень крупный...

News image

Описание вводной лекции Жданова о восстановлении зрения

— устройство глаз — как и почему возникают дефекты зрения — вред, который наносят очки … и многое-многое другое Вы узнаете из вводной лекции курса по восстановлению зрения. Мето...

News image

10 ОСНОВНЫХ ВОПРОСОВ ПО ЛАЗЕРНОЙ КОРРЕКЦИИ ЗРЕНИЯ

перед операцией необходимо сделать укрепление сетчатки ППЛК. В этом случае операцию можно будет сделать не ранее 10-15 дней, в зависимости от успеха процедуры. После проведения к...

Всё про контактные линзы:

Технологии, отвечающие за дизайн

News image

Прогрессивный оптический дизайн контактных линз немаловажен для того, чтобы пациент чувствовал себя в них уверенно и спокойно в ...

Наиболее частые ошибки при пользовании контактными линзами

News image

Желание сэкономить – это вполне естественно, но если вы решили пользоваться контактными линзами, то стоит понять и принять то, ч...

Каковы преимущества однодневных линз?

News image

В отличие от режима применения традиционных контактных линз и линз плановой замены пользователи носят рассматриваемые линзы один...

Однодневки – отличный вариант для спорта и отдыха

News image

Пользователю однодневных контактных линз не приходится затрачивать время, уделяя внимание уходу за линзами, и у него нет абсолют...

Авторизация

Проблемы со зрением:

Нарушения зрения у детей

News image

При каких заболеваниях возникает нарушение зрения у детей: Причины нарушений зрения у детей. Врожденные: - вызванные различными вирусными и инфекц...

Повышенная утомляемость глаз

News image

Повышенная утомляемость глаз, развитие дистрофически-дегенеративных изменений в светопроводящем, рецепторном и мышечном аппарате глаза могут быть пр...

Симптомы болезни:

Блок стекловидного тела

News image

Различают задний и передний блоки стекловидного тела. Задний блок стекловидного тела характеризуется прогрессирующим скоплением жидкости в дополн...

Блокада Шлеммова канала

News image

Различают функциональную и органическую блокаду склерального синуса. Блокада возникает в результате смещения трабекулы кнаружи в просвет шлеммова ка...

Исследование зрения:

ИССЛЕДОВАНИЕ ЗРАЧКОВЫХ РЕАКЦИЙ

News image

Состояние зрачков и их реакция имеют диагностическое значение как при глазных, так и при некоторых общих заболеваниях организма. Различают сужен...

Аппланационная тонометрия

News image

В нашей стране данное исследование выполняют по методике, предложенной А. Н. Маклаковым (1884), котрая заключается в установке на поверхности рогови...